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超聲波對大豆胰蛋白酶抑制劑活性及二級結構的影響

信息來源:http://www.zjjtq.com.cn/ 作者:武漢嘉鵬電子有限公司 發布時間:2022-11-08 14:31

  摘 要:研究了Kunitz型大豆胰蛋白酶抑制劑(KSTI)和Bowman-Birk型大豆胰蛋白酶抑制劑(BBTI)經超聲波處理後的活性、巯基含量、遠紫外圓二色譜的變化。發現KSTI和BBTI的單一吸收負峰在200nm波長處,KSTI的[θ]200nm=-2545deg·cm2·d/mol,, 其二級結構由22.5%β折疊,16.25%β轉角和61.4%無規卷曲組成;BBTI的[θ]200nm= -797deg·cm2·d/mol,由52.6%β折疊和47.4%無規卷曲組成。用65%振幅的超聲波場處理11 min 後,KSTI 的[θ]200nm值變為-1827deg·cm2·d/mol,處理20min後,其β轉角和無規卷曲的含量分别下降至10.8%和54%,而β折疊的含量則增加至35.2%,同時有約71.5%的二硫化鍵轉變成巯基,對胰蛋白酶的抑制活性則被鈍化55%;而BBTI的二級結構則表現穩定,65%振幅的超聲波場處理20min後,[θ]200nm值隻改變為-700 deg·cm2·d/mol,其β折疊、無規卷曲結構以及對胰蛋白酶的抑制活性基本上不受影響,僅有5.29%的二硫鍵轉化成巯基。超聲波可能是通過影響KSTI的二硫鍵,使其二級結構發生變化,從而影響其活性。

  關鍵詞:大豆胰蛋白酶抑制劑;超聲波;圓二色譜 二級結構

  大豆胰蛋白酶抑制劑是一類小分子量的蛋白質或多肽,對胰蛋白酶活性有抑制作用,攝入過量可導緻人和動物患病。如老鼠胰腺腫大和增生,小雞生長停止 [1,2]。因此胰蛋白酶抑制劑被認為是大豆食品和飼料中主要的抗營養因子。加熱通常是有效地鈍化胰蛋白酶抑制劑的一種物理方法[3]。而用化學方法鈍化胰蛋白酶抑制劑則包括修飾、還原、去除或封閉胰蛋白酶抑制劑分子中某些活性基團[4~7]。近期的研究還提示茶葉中的多酚類也能夠有效地鈍化大豆胰蛋白酶抑制劑[8,9]。

  Kunitz型大豆胰蛋白酶抑制劑(KSTI)和Bowman-Birk型大豆胰蛋白酶抑制劑(BBTI)是大豆中兩種具有不同結構和特性的胰蛋白酶抑制劑,其中KSTI包括數種功能高度相似的異構體[10]。KSTI和BBTI由于分子結構上的差異,對物理和化學緻鈍作用的抗性差别很大,BBTI除了對胰蛋白酶有較強的抑制活性外,對于熱、酸的鈍化和胃蛋白酶的水解作用都具有很強的抗性。超聲波場能夠通過影響生物大分子的結構而能顯著地改變其功能,包括生物活性[11,12]。然而關于超聲波對大豆胰蛋白酶抑制劑結構及活性影響的研究報道目前還較少。本實驗通過用超聲波場對KSTI和BBTI進行處理,研究其活性與結構的變化,以揭示其活性、抗鈍化能力的差異與其結構之間的關系。

  産品型号:JP600G型超聲波提取/乳化機組

  機型結構:超聲波發生器與提取罐分體式

  超聲頻率:28KHz

  超聲峰值功率:1000W (由原600W升級至1000W,價格不變)

  提取罐内尺寸:直徑320 ×高250mm

  提取罐容積:小于等于20L

  攪拌電機功率:15W

  攪拌電機轉速:10-30轉/min(可調)

  電加熱功率:2KW

  供電電源:220VAC 50HZ

  具有數顯時鐘可調功能

  具有數顯功率可調功能

  具有數顯掃頻可調功能

  具有數顯溫度可調功能

  武漢嘉鵬電子有限公司專業緻力于超聲波提取/萃取、超聲波乳化、超聲波清洗、超聲波污水處理、超聲波酒類醇化産品的研發、生産及銷售。公司擁有多項技術。其中“數字式大功率多用途超聲波電源系統”獲武漢市重大科技成果獎。數字掃頻實現了用戶迫切需要的變頻要求的同時還彌補了早期雙頻或多頻技術帶來的超聲轉換效率很低的弊端。此項技術經由全國各大院校的用戶使用後反應很好。應用于植物提取、乳化、污水處理等領域,院校包括:清華大學、北京大學、浙江大學、華中科技大學、武漢大學、華中師大、中國地質大學、武漢科技大學、上海交大、浙江工業大學、蘭州大學、河南農業大學、武漢化工學院、吉林大學、四川大學、華南理工大學、華東理工大學、江漢大學、長江大學、中科院武漢植物所、昆明植物所、中科院過程所、中科院武漢物理所、武漢市藥檢所等。公司産品行銷全國除港、澳、台外的所有省份及直轄市。售後方面:公司産品使用自主技術故性能穩定、質量很好。公司承諾5年内免費質保。用戶采用超聲波需注意的事項:超聲波提取方面:一、被提取物需粉碎到20目或更細。粉碎越細得率越高。二、選用合适的提取溶劑。三、根據産品的特性和産量合理的安排提取工藝。

  超聲波乳化方面:一、乳化液的配方包括乳化劑的用量。二、乳化時間的選定,并不是時間長就越好,乳化過程是分散和聚合不停的循環的過程。按現有試驗結果顯示10-15分鐘的乳化粒徑可達100納米。

  重要的是數字掃頻的選擇,此項共有16檔選擇,數值越低則氣泡越粗、力量越大;數值越高則氣泡越細、力量越小。不同的提取或乳化物質改變數字掃頻會帶來不同的效果及效率。

  超聲波提取天然産物包括超聲波提取多肽、氨基酸、核酸、各種酶類、單糖、寡糖、多糖、糖蛋白、樹脂、膠體物、木質素、維生素、脂肪、油脂、蠟、生物堿、揮發油、黃酮、糖苷類、苯丙素類、有機酸、酚類、醌類、甾體化合物、抗生素類等。

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